Parainfluenza-3 (PG-3) skotu (přepravní horečka) je akutní nakažlivé onemocnění, zejména telat, charakterizované horečkou a poškozením dýchacího systému.
Virový charakter onemocnění byl poprvé prokázán v USA v roce 1959. V SSSR bylo toto onemocnění objeveno v roce 1968. Onemocnění bylo registrováno ve všech zemích světa včetně Ruska.
Charakteristika budiče. Virus patří do čeledi Paramyxoviridae, podčeledi Paramyxovirinae, rodu Respirovirus. Viriony viru jsou pleomorfní, ale častěji kulovité nebo vláknité, o průměru 150 nm nebo více. Skládají se z nukleokapsidy šroubovicové symetrie a lipoproteinové membrány, na jejímž povrchu jsou charakteristické výběžky. Genom je reprezentován jednou jednořetězcovou lineární minus-RNA molekulou.
V přirozených podmínkách způsobuje virus PG-3 onemocnění skotu, které postihuje až 90–100 % zvířat. Postižena jsou telata mladší jednoho roku. Existují zprávy o izolaci viru z buvolů, ovcí, koní. Protilátky proti viru PG-3 byly nalezeny u 60-100 % klinicky zdravých telat, ovcí, koz, velbloudů, psů a potkanů. Bylo zjištěno, že u buvolů a jehňat může virus PG-3 způsobit poškození dýchacího a gastrointestinálního traktu.
Odolnost proti fyzikálním a chemickým vlivům. Virus je citlivý na opakované zmrazování a rozmrazování, rychle umírá pod vlivem UV záření; expozice tukovým rozpouštědlům (éter, chloroform) vede k úplné ztrátě infekční aktivity. Nízké hodnoty pH mají škodlivý účinek na virus, je dobře zachován při pH 6,8-7,5. Zahřívání na 50 °C po dobu 80 minut vede k jeho úplné inaktivaci. Ošetření 0,4% roztokem formalínu a 1% roztokem (β-propiolaktonu) ničí infekčnost viru Expozice 0,4% ethyleniminu po dobu 20 hodin neovlivňuje hemaglutinační aktivitu, ale ničí infekčnost viru Virus dobře snáší lyofilizaci.
Antigenní struktura. Ve virionech bylo nalezeno šest polypeptidů (L, P, NP, M, HN, F), z nichž tři (L, P, NP) jsou asociovány s nukleokapsidou a tři (M, HN, F) jsou součástí lipoproteinového obalu ; dva z nich (HN, F) jsou glykoproteiny, které tvoří výběžky vnějšího obalu. Jsou zodpovědné za hemaglutinaci, aktivitu neuraminidázy, adsorpci virionů na buněčný povrch a buněčnou fúzi.
Antigenní variabilita. Antigenně jsou všechny kmeny virů PG-3 izolované v různých zemích totožné a odpovídají prototypu kmene SF-4 izolovanému v USA. Byly zjištěny určité rozdíly v hemaglutinační, neuraminidázové a syncytiové aktivitě. Byla stanovena podobnost (ale ne identita) mezi kmeny viru PG-3 u skotu a ovcí. Hovězí virus PG-3 má úzký antigenní vztah s virem lidské parainfluenzy třetího sérotypu.
Antigenní aktivita. Virus PG-3 má výraznou antigenní aktivitu. Při přirozené i umělé imunizaci se objevují specifické protilátky, které se nacházejí v RTGA, PH, RSK a RDP. Nejprve jsou detekovány antihemaglutininy (6.-7. den), které jsou detekovány ve významné hladině (1:64-1:256) po dobu 6 měsíců.
Kultivace virů. Primární kultury buněk bovinních embryonálních ledvin (BEK), ledvin, telecích plic (PT, LT) a buněk bovinních varlat (TB) lze úspěšně použít k propagaci viru PG-3. Kromě toho se virus PG-3 množí i v transplantovaných buněčných liniích: Taurus 1, MDVK, PS (saiga pupeny), PLEK, VNK-21 atd. Všechny kmeny viru vyvolávají podobný cytopatický efekt, charakterizovaný tvorbou tzv. syncytium a vakuoly. Načasování manifestace hemadsorpce a CPP nezávisí na kmeni, ale na typu buněčné kultury. Virus PG-3 se také reprodukuje ve vyvíjejících se kuřecích embryích, ale infikovaná embrya neumírají.
Hemaglutinační vlastnosti. Virus dobře a s menší aktivitou aglutinuje erytrocyty morčete – erytrocyty králíka, prasete, krávy, opice, myši, buvola, holuba, ovce, kozy; neaglutinuje koňské erytrocyty. Údaje o aglutinaci kuřecích erytrocytů jsou rozporuplné. Čerstvě izolované virové kmeny aglutinují erytrocyty lépe při 4 °C než při 37 °C. Hemaglutinační aktivita viru se výrazně zvyšuje po ošetření etherem a tweenem.
Hemadsorpční vlastnosti. Buňky infikované virem PG-3 získávají schopnost adsorbovat na svém povrchu erytrocyty morčete a v menší míře i erytrocyty jiných živočišných druhů. Virus způsobuje difúzní adsorpci erytrocytů. Je důležité poznamenat, že hemadsorpce se u infikovaných buněk objevuje dříve než cytopatický účinek.
experimentální infekce mohou být reprodukovány v telatech v nepřítomnosti specifických protilátek. Laboratorní zvířata jsou vůči viru imunní. Některým výzkumníkům se podařilo vyvolat experimentální infekci u jehňat, selat a kojených myší.
Klinické příznaky. Inkubační doba onemocnění trvá 1-2 dny. Klinické onemocnění se projevuje různými způsoby: od mírné rýmy a bronchitidy až po těžkou bronchopneumonii. Průběh onemocnění je dán mnoha predisponujícími stresovými faktory (poruchy v krmení a chovu, přepravě, přelidnění atd.), imunitním a fyziologickým stavem zvířat; způsob infekce; dávka a virulence viru. Dříve se PR-3 nazývalo „přepravní horečka“.
U zvířat zvýšení tělesné teploty na 41-42 ° C po dobu 1-2 týdnů, deprese, dušnost, serózně-slizniční výtok z nosu, očí, někdy se vyvine průjem, odmítání krmení. Pokud nedojde ke komplikacím v důsledku sekundární bakteriální mikroflóry, pak se po 2-3 týdnech zvířata zotaví. V těžkých případech onemocnění je pozorován silný kašel, intenzivní výtok z nosu, očí, ústní dutiny a výskyt erozí na ústní sliznici. U telat se subakutním a chronickým průběhem jsou zaznamenány mukopurulentní výtoky z nosu a očí, známky zánětu pohrudnice, zápalu plic, někdy i enteritidy. U dospělých zvířat není infekce obvykle doprovázena příznaky respiračního onemocnění, ale u březích krav může vést k intrauterinní infekci plodu, potratu nebo porodu neživotaschopných telat.
Na výsledek onemocnění má vliv mnoho komplikujících stresových faktorů, virulence cirkulujícího kmene viru, současná infekce zvířat jinými viry (adenoviry, viry infekční rinotracheitidy, průjmy aj.), chlamydiemi a pasteurelami.
Patologické změny. Nacházejí se především v dýchacích orgánech: katarální zánět nosní sliznice, hyperémie sliznice a hlenovitě hnisavý exsudát v průdušnici, průduškách, zhutněná ložiska v plicích, známky emfyzému. Faryngeální a bronchiální lymfatické uzliny jsou edematózní, s krvácením. Na pohrudnici, pobřišnici, epikardu – petechiální krvácení. Na sliznici slezu – krvácení, eroze a vředy. Střevní sliznice je oteklá, s krvácením.
Lokalizace viru. Virus PG-3 se rychle množí v buňkách dýchacích cest a dalších orgánů. 1-10 dní po infekci lze izolovat z exkrementů dýchacích cest, hrtanu, průdušnice, plic, regionálních lymfatických uzlin, sleziny, jater, nadledvin. Jsou také izolováni z varlat telat a býků a poměrně často ze semene samců.
Zdroj infekce – nemocná zvířata. K infekci dochází vzdušnými kapkami a případně orálně mlékem nemocných krav. Možnost pohlavního přenosu patogenu není vyloučena, protože se nachází ve spermatu, vaginálních sekretech a tkáních potracených plodů.
diagnostika. Diagnóza je stanovena na základě epizootologických údajů, příznaků onemocnění, patologických změn a laboratorních testů.
PG-3 se diagnostikuje pomocí sady diagnostických souprav vyráběných biologickým průmyslem. Obvykle se provádí souběžně se studiem materiálu pro adenoviry, respirační syncytiální infekce, infekční rinotracheitidu a virové průjmy u skotu.
Předběžná diagnóza pro PG-3 se stanoví během 2-3 dnů na základě pozitivních výsledků detekce virového antigenu v patologickém materiálu v RIF, přičemž se berou v úvahu epizootologická data, klinické příznaky a patologické změny. Onemocnění je nakonec diagnostikováno během 10-30 dnů na základě shody výsledků RIF s izolací a identifikací viru, průkazem 4násobného a vícenásobného zvýšení protilátek v párových vzorcích krevního séra.
Sběr a příprava materiálu. Stejně jako u adenovirové infekce.
Laboratorní diagnostika. Detekce virového antigenu v patologickém materiálu (stěry-otisky) se provádí pomocí RIF; virová nukleová kyselina se stanoví pomocí polymerázové řetězové reakce (PCR).
izolace virus z patologického materiálu se provádí v primární buněčné kultuře PEC, LEC, PT, TB nebo v transplantovaných buněčných liniích Taurus 1, PLEC atd. Virus se považuje za izolovaný, pokud způsobuje stabilní CPP stejného typu a pozitivní ( RGAd) s erytrocyty morčete.
Virus PG-3 lze izolovat i z kuřecích embryí, která se nejlépe infikují v plodové dutině. Izolace viru na přirozeně vnímavých zvířatech se neprovádí kvůli vysoké ceně a velké obtížnosti výběru telat, která nemají specifické protilátky. Laboratorní zvířata jsou necitlivá na virus PG-3.
Identifikace izolovaný virus se provádí v sérologických reakcích: RTGAd, RIF, RTGA, PH, ELISA. Nejrychlejší metodou pro identifikaci izolovaného viru s hemadsorbujícími vlastnostmi je RTGAd s erytrocyty morčete.
Retrospektivní diagnostika. Za tímto účelem se vyšetřují párová krevní séra odebraná alespoň 10-15 zvířatům v intervalu 2-3 týdnů. Sérum se vyšetřuje v sérologických reakcích: RTGA (častěji), ELISA, PH. Byla navržena velmi citlivá a jednoduchá reakce nepřímé hemaglutinace (IHA). Kromě studia párových krevních sér v sérodiagnostice PG-3 se doporučuje metoda detekce sekrečních protilátek u RTHA. Chcete-li to provést, odeberte vzorky nosního sekretu od 10-15 zvířat, která vykazovala klinické příznaky onemocnění, a znovu – po 6-8 dnech.
Za pozitivní výsledek testu na PG-3 se považuje, pokud jsou protilátky detekovány ve druhém vzorku nosního sekretu v titru 1:16 nebo vyšším (při absenci protilátek v prvním vzorku) nebo pokud je 4násobný nebo vícenásobný nárůst titr protilátek ve druhém vzorku je stanoven ve srovnání s prvním.
Diferenciální diagnostika. Laboratorní studie vylučují řadu onemocnění, která jsou klinicky podobná: adenoviry, respirační syncyciální infekce, infekční rinotracheitida, virové průjmy, chlamydie, i když se tyto infekce velmi často vyskytují v různých asociacích.
Imunita a specifická profylaxe. Zvířata, která byla nemocná 3-4 měsíce, jsou imunní vůči opětovné infekci. Důležitým faktorem imunity je lokální imunita buněk sliznice dýchacích orgánů, způsobená tvorbou sekrečních protilátek a interferonu, častěji detekovaného ve vyšším titru po intranazální vakcinaci živým virem než po subkutánní vakcinaci inaktivovaný virus. Humorální protilátky po vakcinaci přetrvávají u zvířat 6-12 měsíců. V ochraně proti parainfluenze-3 převládají humorální faktory, ale dobře se projevuje i buněčná imunita. Telata narozená z imunních krav dostávají protilátky s kolostrem. Doba trvání kolostrální imunity je 1,5-2 měsíce. Někteří vědci se však domnívají, že protilátky z kolostra chrání asi 50 % telat ve věku jednoho měsíce. Vakcinace telat je účinnější v období zániku mateřských protilátek, protože kolostrální protilátky blokováním vakcinačního antigenu brání aktivní tvorbě sérových protilátek, proto se doporučuje vakcinovat telata intranazálně.
Pro specifickou prevenci parainfluenzy-3 se používají především živé vakcíny z oslabených kmenů viru. Stále častěji se používají živé kombinované vakcíny obsahující oslabené kmeny PG-3, RTI, VD a inaktivované pasteurely a chlamydie.
